Autoclaaf sterilisatie -effect verificatie

Een van de essentiële laboratoriuminstrumenten in een microbiologielaboratorium is de sterilisator, waarbij autoclaven het meest gebruikte type zijn. Volgens GB 4789.1-2016 moet laboratoriumapparatuur regelmatig worden geïnspecteerd en/of gekalibreerd (met geschikte etikettering), onderhouden en onderhouden om operationele prestaties en veiligheid te garanderen. Maar ondergaat uw sterilisator soortgelijke inspecties? Als een dergelijke validatie vereist is, hoe moet deze dan worden uitgevoerd?

Vandaag zullen we de belangrijkste aspecten van sterilisatie -werkzaamheidsvalidatie voor autoclaves samenvatten.

De gemeenschappelijke methoden voor het valideren van autoclaaf-sterilisatie-werkzaamheid omvatten de chemische indicatiemethode, de thermometermethode met vaste punt, de zelfgemaakte temperatuursonde-methode en de biologische indicatormethode. De principes achter deze methoden zijn vergelijkbaar, vooral gericht op het verifiëren of de temperatuur in de sterilisator het vereiste niveau bereikt tijdens sterilisatie. Afhankelijk van de specifieke voorwaarden van het laboratorium kunnen een of meerdere methoden worden geselecteerd voor validatie.

1. Chemische indicatiemethode
Principe: chemische indicatoren ondergaan kleurverandering of vervorming bij blootstelling aan een specifieke temperatuur en duur, waardoor wordt voldaan of sterilisatieparameters zijn voldaan.

Een veelgebruikte indicator in laboratoria is de 3M Autoclave -indicatortape, die van kleur verandert voor en na sterilisatie om de effectiviteit aan te geven. Deze tape is gemaakt met warmtegevoelige chemicaliën en kleur-ontwikkelingsmiddelen gedrukt in strepen op een speciale lijmband. De tape moet op de buitenkant van het pakket worden aangebracht, met een minimale lengte van 5 cm, en stevig ingedrukt voor een betere hechting en afdichting. Na sterilisatie bij 121 ° C gedurende 20 minuten of 130 ° C gedurende 4 minuten, worden de diagonale witte strepen op de tape volledig zwart. Als de kleurverandering ongelijk of onvolledig is, heeft het pakket mogelijk geen sterilisatievoorwaarden.

2. Methode voor een thermometer met vaste punt
Principe: deze methode maakt gebruik van een kwikthermometer die de hoogste bereikt temperatuur behoudt, vergelijkbaar met een traditionele klinische thermometer. Het helpt bij het bepalen van de maximale temperatuur die wordt bereikt in de autoclaaf tijdens sterilisatie.

Voor validatie wordt een kwikthermometer geplaatst in een grote conische kolf gevuld met water. Tijdens sterilisatie wordt de kolf op zowel de bovenste als onderste delen van de autoclaaf geplaatst. Na sterilisatie wordt de thermometeraflezing gecontroleerd tegen de vereiste temperatuur. Deze methode verifieert echter alleen de temperatuur en bevestigt echter niet of de sterilisatieduur voldoende was, waardoor het de meest elementaire standaard is voor autoclaaf -validatie.

3. Zelfgemaakte temperatuursonde-methode
Principe: deze methode maakt gebruik van de smelt- en herkristallisatie -eigenschappen van bepaalde chemicaliën bij blootstelling aan warmte. Door deze chemicaliën in kleine glazen buizen af ​​te dichten en ze in de autoclaaf te plaatsen, kan de kristalvorming na sterilisatie aangeven of de vereiste temperatuur is bereikt.

Een veelgebruikt reagens is benzoëzuur, dat een smeltpunt heeft van 121-123 ° C, die nauw overeenkomt met de vereiste sterilisatietemperatuur. Tijdens sterilisatie wordt vast benzoëzuur afgesloten in een kleine glazen buis en in de autoclaaf geplaatst. Na het proces wordt de kristalstructuur van het benzoëzuur onderzocht om te bepalen of de vereiste temperatuur is bereikt.

Net als de thermometermethode met vaste punt, geeft deze benadering alleen aan de temperatuur aan en kan hij niet bevestigen of de sterilisatieduur voldoende was.

4. Biologische indicatiemethode
Principe: deze methode maakt gebruik van niet-pathogene Geobacillus stearothermophilus-sporen als indicatororganismen om de effectiviteit van warmte-sterilisatie te beoordelen. Deze sporen zijn zeer bestand tegen warmte en hebben een thermische weerstand vergelijkbaar met Clostridium -botulinumsporen, waardoor ze een betrouwbare referentie zijn om te evalueren of de autoclaaf voldoet aan sterilisatievereisten.

Biologische indicatoren zijn er in drie vormen:

Sporenophanging
Sporenstroken
Spore strips gecombineerd met een kweekmedium (biologische indicatiebuizen)
De biologische indicatoren worden meestal geplaatst op vijf locaties in de sterilisatiekamer:

Lager niveau: voor, midden en achterkant
Bovenste niveau: midden
Na sterilisatie worden de indicatoren geïnoculeerd in bromocresol paars-glucose peptonwater en gedurende 2-7 dagen geïncubeerd bij 55-60 ° C:

Als het kweekmedium duidelijk en ongewijzigd van kleur blijft, zijn de sporen gedood, wat duidt op effectieve sterilisatie.
Als het medium geel en troebel wordt, hebben de sporen overleefd, wat betekent dat het sterilisatieproces niet effectief was.
Dezelfde validatiemethode is van toepassing op zowel spore -ophangingen als spore -strips.

Veel laboratoria gebruiken ook commerciële biologische indicatiebuizen, die op dezelfde manier werken als spore -suspensies en strips. Deze buizen bevatten G. stearothermophilus sporen samen met een glazen ampul van kweekmedium. Na autoclaveren wordt de glazen ampoule in de buis verpletterd om het kweekmedium vrij te geven, en de buis wordt geïncubeerd bij 56 ° C, met een positieve controle inbegrepen.

Als sterilisatie niet effectief was, zullen levensvatbare sporen groeien, waardoor het bouillon geel wordt.
Als sterilisatie succesvol was, zijn de sporen geïnactiveerd en blijft de bouillon paars.
Frequentie van autoclaaf -validatie
Momenteel zijn er geen strikte regelgevingsnormen die bepalen hoe vaak autoclaves moeten worden gevalideerd. Laboratoria moeten echter hun eigen validatieschema vaststellen en zich er strikt aan houden.

Voor gemak van werking en betrouwbare validatie worden chemische indicatortape en biologische indicatiebuizen sterk aanbevolen. Deze methoden zijn gebruiksvriendelijk en bieden een uitgebreide beoordeling van de effectiviteit van sterilisatie.

Belangrijkste overwegingen voor autoclaveren
(Sommige volledig geautomatiseerde geïmporteerde autoclaven vereisen mogelijk geen handmatige ventilatie)

Wanneer u een autoclaaf gebruikt, is het essentieel om koude lucht uit de kamer te verwijderen terwijl u stoom introduceert. De uitlaatopening moet open blijven totdat alle koude lucht wordt uitgezet, waardoor een gelijkmatige temperatuurverdeling binnen wordt gewaarborgd.

Als lucht in de kamer blijft, kan de manometer de juiste druk aangeven, maar de werkelijke temperatuur zal lager zijn dan verwacht. Hoe meer resterende lucht, hoe groter de discrepantie, wat leidt tot onvolledige sterilisatie.

(Voor degenen die luchtbellen in kleine buizen tegenkomen bij het steriliseren van gebaseerde fermentatie-media, probeer de luchtevacuatie te verhogen om de resultaten te verbeteren.)